Tesis para optar el título de Doctor en Ciencias Naturales ante la Universidad Nacional de la Plata

Director: Dulout, Fernando;
Co-director: Cabrini, Rómulo

Los embriones de preimplantación cultivados ín vítro son empleados desde hace algún tiempo para evaluar los efectos de contaminantes ambientales en especial metales. En este trabajo se ha utilizado este modelo para presentar los efectos citotóxicos, embriotóxicos y genotóxicos del uranio. Los embriones fueron obtenidos mediante superovulación de hembras híbridas CBA x C57 BI, apareadas luego con machos NIH y cultivados en medio M16 como medio control. Tres experimentos diferentes se llevaron adelante A, B y C utilizando nitrato de uranilo hexahidratado U02(NO3)2 6H20 como fuente de uranio. En el experimento A los embriones desde el estadio de una célula se cultivaron durante 120 hs en la misma placa, conteniendo una concentración final de uranio de 13, 26, 52, 104 y 208 ugU/ml. En el experimento B los embriones fueron puestos a cultivar desde el estadio de una célula a una concentración final de uranio de 26, 52 y 104 ugU/ml, a las 24 hs de cultivo los embriones que pasaron a 2 células fueron cambiados a una placa preparada nuevamente, manteniendo las mismas concentraciones de uranio que la anterior, hasta finalizar el periodo de incubación de 120 hs.
En el experimento C los embriones fueron puestos a cultivar desde el estadio de una célula a una concentración final de uranio de 26, 52 y 104 ugU/ml y fueron cambiados de placa de cultivo cada 24 hs, manteniendo estas placas nuevas las mismas concentraciones de uranio que la primera y el cultivo finalizó a las 72 hs. Las soluciones de uranio para el cultivo fueron preparadas frescas el dia del cambio de placa. A los fines de sincronizar los cultivos, los embriones de una célula que a las 24 hs no clivaron a dos células fueron retirados de los tres experimentos. Fue monitoreado el porcentaje de desarrollo alcanzado por los embriones: estadio de 2, 4 y 8 células, mórula, blastocisto temprano, expandido, extruído y embriones atrésicos para verificar el grado de desarrollo alcanzado a las 24, 48, 72, 96 y 120 hs. El clivaje embrionario desde 1 célula a 2 células no se ha visto estad ísticamente afectado respecto del control, en los 4388 embriones analizados, en los diferentes tratamientos y las diferentes concentraciones de uranio empleadas. Desde el clivaje de 2 células en adelante, momento que el embrión comienza a sintetizar su propio ARNm, el retraso en el desarrollo embrionario, el grado de fragmentación, el porcentaje de embriones atrésicos y las malformaciones embrionarias se incrementaron de forma dosis dependiente y desde el tratamiento A hacia el tratamiento C.